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    胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)的使用說明
  • 發(fā)布日期:2023-04-24      瀏覽次數:1356
    • 產品說明:

      在組織細胞的體外培養(yǎng)和原代細胞培養(yǎng)中的組織細胞分散(將組織塊制備成單個細胞懸液)以及傳代細胞培養(yǎng)中,貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶,EDTA等,其功能主要是使細胞間的蛋白質(如細胞外基質)水解,使組織或貼壁細胞分散成單個細胞,制成細胞懸液用于進一步的實驗。

      胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶和0.02%EDTA(0.53mM),溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中,經過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化。胰蛋白酶-EDTA消化液具有方便快速、穩(wěn)定安全、細胞狀態(tài)好等特點。通常室溫消化2分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。胰蛋白酶-EDTA消化液有含酚紅和不含酚紅2類產品,酚紅具有pH 指示作用。


      使用方法:

      1. 貼壁細胞的消化:

      a) 吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA消化液,蓋過細胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。

      c) 顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的規(guī)格100ml 100ml 備注不含酚紅含酚紅

      變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。

      d) 如果發(fā)現消化不足,可加入胰蛋白酶-EDTA消化液重新消化。

      e) 如果發(fā)現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。

      2. 組織的消化:

      不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。


      注意事項:

      1.由于組織或細胞性質不同,實驗人員應依據具體情況,確定最佳消化時間;消化細胞時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁和生長狀況;

      2.本產品不含抑菌劑,在使用過程中要特別注意無菌操作,避免消化液被微生物污染;

      3.不宜4℃長期保存,切忌反復凍融,小量使用時建議分裝凍存;

      4.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


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